液相色谱仪的使用步骤是什么？

目的：制定规范的高效液相色谱仪操作 、维护保养和清洁规程 。

范围：适用于Agilent1260HPLC
。

责任：色谱检验工程师负责本规程执行。

内容：

1开机

1.1打开电脑 。

1.2打开液相色谱各个模块的电源。

1.3双击桌面“仪器—联机”，进入联机界面
。

1.4排气：

1.4.1手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈）。

1.4.2右键单击“泵 ”图标区域 ，选择“方法?
”选项
，进入泵编辑画面，设流速：5ml/min（一般为3－5ml/min） ，点击“确定” 。

1.4.3右键单击“泵 ”图标，点击“控制?”选项
，选中“ON
”，点击“确定” ，则系统开始冲洗
，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止，（一般为5分钟） ，切换通道继续冲洗
，直到所有要用通道无气泡为止
。

1.4.4右键单击“泵 ”图标，点击“方法?
”选项 ，设流速：0ml/min
，手动旋紧冲洗阀。

1.4.5右键单击“泵”图标，点击“方法? ”选项 ，按照方法要求选择合适比例的流动相
，设流速：1.0ml/min 。

1.4.6同理右键单击“柱温箱
”，“检测器”图标 ，点击“方法? ”选项，按照方法的要求设置温度
，波长，点击“控制
”选项 ，“ON”打开柱温箱和检测器
。

2编辑方法

2.1点击“方法 ”－“编辑完整方法
”开始编辑完整方法。

2.2选中除“数据分析”外的三项
，进入下一选项卡 。

2.3方法信息：在“方法注释 ”中加入方法的信息（如：Thisisfortest!）
。进入下一选项卡。

2.4泵参数设定：在“流速”处输入流量,如1.0ml/min，停止时间：如10min（该停止时间仅为做一个样品需要的时间） ，按照要求选择合适比例的流动相配比
，如乙腈：水＝75：25，A为水 ，B为乙腈
，则设置B：75％即可 。进入下一选项卡
。

2.5自动进样器参数设定:选择“洗针进样
”----可以输入进样体积和洗瓶位置，进入下一选项卡。

2.6柱温箱参数设定:在“温度”下面的空白方框内输入所需温度,如：40度 。进入下一选项卡。

2.7UV检测器参数设定:在“波长 ”下方的空白处输入所需的检测波长,如254nm
。点击确定。

2.8在“运行时选项表
”中 ，选中“数据采集”
，点击“确定 ” 。

2.9从“方法
”菜单，选中“方法另存为?” ，输入一方法名，如“测试 ”
，点击“确定
。

3单次采集

3.1从“运行控制
”菜单中，选择“样品信息”选项 ，选择合适的路径
，在“数据文件 ”中选择“前缀/计数器
”，输入样品瓶的位置 ，点击“确定”。

3.2基线平稳后约10分钟
，从“运行控制 ”菜单中选择“运行方法” 。

4多次数据采集

4.1按照步骤2编辑完整方法
。

4.2点击“序列
”－“序列表”，输入“样品瓶 ”“样品名称
” ，“进样次数”
，选择合适的“做样方法 ”

4.3点击“序列
”－“序列参数”，选择序列数据的保存路径（序列会自动生成以“序列名称－时间 ”为名称的文件夹保存数据） ，数据建议以选择“前缀/计数器
”保存。

4.4从“序列”菜单
，选中“序列另存为? ”，输入一序列名 ，如“测试
”，点击“确定 。

4.5从“运行控制”菜单中选择“运行序列 ”
。

5数据分析（脱机状态使用）

5.1双击“仪器—脱机”图标进入的脱机画面。

5.2从“视图
”菜单中
，点击“数据分析”进入数据分析画面 。

5.3从“文件 ”菜单选择“调用信号
”，选中您的数据文件名
。点击“确定” ，则数据被调出。（如预建立标准曲线
，应先打开浓度较低的标样图谱 。）

5.4做谱图优化：从“图形 ”菜单中选择“信号选项
”。从“范围”中选择“满量程 ”或“自动量程
”及合适的时间范围或选择“自定义量程”调整
。反复进行，直到图的比例合适为止。点击“确定 ” 。

6积分:

6.1从“积分
”菜单中选择“积分事件”选项 ，选择合适的“斜率灵敏度 ”
，“峰宽”，“最小峰面积
” ，“最小峰高”
。点击
，自动加载积分参数。

6.2点击左边“√ ”图标，将积分参数存入方法并退出“积分事件
” 。

6.3如积分结果不理想 ，则修改相应的积分参数
，直到满意为止
。

7标准曲线

7.1点击“校正”－“校正设置 ”，输入“含量单位
”。

7.2点击“校正”－“新建校正表 ” ，点击确定 。输入“化合物名称
”和“含量”，点击“确定 ”
，按照提示删除其他组分
。

7.3至此完成单级校正，如要增加校正级别 ，应从“文件
”菜单选择“调用信号”
，选中您的数据文件名（第二个标样），点击“校正 ”－“添加级别” ，点击确定
，输入“含量
”，依次增加校正级别。

8打印报告

8.1从“报告”菜单中选择“设定报告 ”选项 ，点击“定量结果
”框中“定量”右侧的黑三角
，选中“外标法 ”，其它选项不变 ，点击“确定
” 。

8.2从“报告”菜单中选择“打印报告 ”
，则报告结果将打印到屏幕上，如想输出到打印机上 ，则点击“报告
”底部的“打印”钮
。

8.3点击“文件 ”－“另存为
”－“方法”，把数据分析方法保存
，下次分析可直接在“文件 ”－“调用”－“方法
”下，将该方法调出使用。（调用的方法中含有积分方法 ，标准曲线方法和打印报告方法）

9关机

9.1关机前
，先关紫外灯，用相应的溶剂（甲醇或乙腈）充分冲洗系统大约30分钟 。（色谱柱最终应保存在甲醇或乙腈中）

9.2退出化学工作站 ，依提示关泵
，及其它窗口，关闭计算机。

9.3关闭Agilent1260各模块电源开关
。

10其它注意事项

10.1当样品运行时 ，切勿打开自动进样器前遮盖
，否则进样过程停止。

10.2系统发生漏液时，机器会检测到并停止进样 ，状态指示灯为红色 。检查擦干并安置好漏液处
，擦干漏液传感器，单击ON按钮 ，系统重新初始化
。

10.3注意紫外灯使用寿命，切勿来回开关紫外灯。

高效液相色谱仪操作步骤如下：

1)． 过滤流动相
，根据需要选择不同的滤膜.

2)． 对抽滤后的流动相进行超声脱气10-20分钟 。

3)． 打开hplc工作站（包括计算机软件和色谱仪），连接好流动相管道 ，连接检测系统
。

4)． 进入hplc控制界面主菜单
，点击manual，进入手动菜单。

5)． 有一段时间没用 ，或者换了新的流动相
，需要先冲洗泵和进样阀 。

6)． 调节流量，初次使用新的流动相 ，可以先试一下压力
，流速越大，压力越大 ，一般不要超过2000
。

7)． 设计走样方法。

8)． 进样和进样后操作 。

9)． 关机时
，先关计算机，再关液相色谱
。

10)． 填写登记本 ，由负责人签字。

11)． 流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水 。

12)． 柱子是非常脆弱的
，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。

13)． 所有过柱子的液体均需严格的过滤
。

14)． 压力不能太大 ，最好不要超过2000 psi。

高效液相色谱法（HighPerformanceLiquidChromatography\HPLC）又称“高压液相色谱”
、“高速液相色谱 ”、“高分离度液相色谱
” 、“近代柱色谱”等 。它是在生化和分析化学中常用的柱层析仪
。

高效液相色谱是色谱法的一个重要分支
，以液体为流动相，采用高压输液系统 ，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱
，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测 ，从而实现对试样的分析。

该方法有效方便快捷地解决化学
、医学、工业 、农学
、商检和法检等学科领域中得出想要的数据
，成为重要的分离分析技术 。